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    教你如何使用硅藻土純化牛血清白蛋白
    發布時間:2022-04-24   點擊次數:77次
      用硅藻土純化牛血清白蛋白(去除牛血清白蛋白中的核酸酶)時,使用的懸浮液為Tris-HCl緩沖溶液,濃度為50mM,pH為7.8;使用的透析液為Tris-HCl緩沖溶液,濃度為10mM,pH為8.0;硅藻土以及懸浮液使用前在121℃條件下滅菌30min。具體的純化步驟為:
     
      (1)將6g硅藻土用60mL懸浮液(硅藻土與懸浮液的比例為1:10w/v)混合,置于100℃沸水浴中5min,室溫條件下攪拌5min,5000rpm離心10min,丟棄上清液;重復上述洗滌步驟3次后,將洗滌后的硅藻土在60mL懸浮液中分散均勻,得到吸附劑分散液,在4℃條件下儲存備用;
     
      (2)將2.5g牛血清白蛋白在12.5mL懸浮液中(牛血清白蛋白與懸浮液的比例為1:5w/v)溶解分散均勻,加入18.75mL吸附劑分散液,在4℃攪拌30min后,在該溫度下10000rpm離心10min,收集上清;
     
      (3)在上清液中加入18.75mL吸附劑分散液(牛血清白蛋白懸浮液與吸附劑分散液的比例為1:1.5v/v),在4℃攪拌30min,在該溫度10000rpm離心10min,收集上清液;再重復一次;
     
      (4)收集的上清用0.45μm膜過濾后,即得牛血清白蛋白純化液;
     
      (5)采用分子截留量為10KD的超濾濃縮管2500rpm離心20min,對蛋白濃度進行超濾濃縮,得到超濾牛血清白蛋白樣品;
     
      (6)將超濾牛血清白蛋白樣品采用分子截留量為14000Da的透析袋4℃條件下攪拌透析2h后,更換透析液透析過夜,超濾牛血清白蛋白樣品與透析液的體積比為1:15;
     
      (7)透析后的樣品測定蛋白濃度后,稀釋至10mg/ml,分裝成1mL/支,保存于-20℃。

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